Благоприятный иммуностимулирующий эффект кратковременного применения хлореллы: повышение активности клеток естественных киллеров и ранняя воспалительная реакция (рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое исследование)

Резюме
Исследования in vitro и на животных показали, что хлорелла является мощным биологическим модификатором иммунитета. Однако прямых доказательств влияния добавок хлореллы на иммунные и/или воспалительные реакции здоровых людей до сих пор не было получено.

Было проведено 8-недельное рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование действия 5 г хлореллы (23 пациента) или плацебо (28 пациентов) в форме таблеток. Главным образом измеряли цитотоксическую активность естественных киллеров (NK) и концентрации интерферона-γ, интерлейкина-1β и интерлейкина-12 в сыворотке крови.

Через 8 недель концентрации интерферона-γ (р<0,05) и интерлейкина-1β в сыворотке крови достоверно увеличились, а концентрация интерлейкина-12 имела тенденцию к увеличению в группе приема хлореллы. Приращения концентраций этих цитокинов после завершения исследования были значительно больше в группе хлореллы, чем в группе плацебо. Кроме того, активность NK-клеток (%) была значительно увеличена в группе хлореллы, но не в группе плацебо. Усиление активности NK-клеток (%) также было значимо больше в группе хлореллы, чем в группе плацебо. Кроме того, изменения уровня активности NK-клеток были положительно коррелированы с концентрациями в сыворотке интерлейкина-1β (коэффициент корреляции r = 0,280, достигнутый уровень значимости р = 0,047) и интерферона-γ (r = 0,271, р <0,005). Значимые положительные корреляции также наблюдались в сыворотке крови между интерфероном-γ и интерлейкином-1β (r = 0,448, р <0,001), между интерлейкином-12 и интерлейкином-1β (r=0,416, р=0,003) и между интерлейкином-12 и интерфероном-γ (r = 0,570, р <001).

Полученные результаты могут свидетельствовать о благоприятном иммуностимулирующем эффекте кратковременных добавок хлореллы, усиливающем у здоровых людей активность NK-клеток и продукцию интерферона-γ и интерлейкина-12, а также интерлейкина-1β и цитокинов, индуцированных клетками Th-1.

Введение
Хлорелла принадлежит к одноклеточным зеленым водорослям, которые содержат незаменимые аминокислоты, белки, минералы, витамины, пищевые волокна, а также широкий спектр антиоксидантов, биологически активных веществ, хлорофиллов и т. д. [1,2]. Это популярный продукт питания во всем мире, особенно в азиатских странах, то есть в Японии, Корее и на Тайване.

Различные фармакологические эффекты хлореллы изучали не только на животных моделях [3,4], но и в экспериментах на людях [5-7]. Согласно Okudo и соавторам [5], у пациентов с гиперхолестеринемией, которые употребляли хлореллу, снижался уровень холестерина в крови. Fujiwara и соавторы [6] также показали положительное влияние потребления хлореллы на гиперлипемию. Накамура и др. показали, что потребление хлореллы снижает артериальное давление у людей с умеренной гипертонией [7]. Добавление хлореллы в течение 6 недель оказало благоприятное влияние на антиоксидантный статус у курящих мужчин [8]. Кроме того, был продемонстрирован значительный антиоксидантный эффект хлореллы и снижение уровня глюкозы в крови на экспериментальных моделях диабета и у мышей, с язвами, вызванными стрессом [9-15].

Исследования in vitro и на животных показали, что хлорелла или экстракт хлореллы участвуют в модуляции иммунных реакций против опухолей [16-18], бактериальной и вирусной инфекции [19-23], а также нативного Ags, т.е. казеина [24]. Сообщалось, что пероральное введение экстракта Chlrorella усилило устойчивость к инфекции внутриклеточной бактерией Listeria monocytogenes за счет усиления клеточного ответа лимфоцитов крови (T-хелперов-1,Th1) в норме и у особей с ослабленными иммунитетом [21,22]. Тем не менее, не было получено прямых доказательств влияния добавок хлореллы на иммунные реакции человека, особенно у неинфицированных нормальных людей, что послужило целью данного исследования.

Материалы и методы исследования

Участники исследования (60 человек) были набраны из пациентов Центра здравоохранения больницы Йонсей. Из исследования исключали субъектов со следующим анамнезом: 1) клинические или электрокардиографические признаки ишемической болезни сердца, инсульта, инфаркта миокарда или окклюзии периферических артерий; 2) сахарный диабет (глюкоза натощак ≥126 мг/дл; 3) нарушение функции печени или почек; 4) заболевания щитовидной железы или гипофиза; 5) острое или хроническое воспалительное/иммунное заболевание, включая злокачественную опухоль, заболевание легких, лейкоз, аутоиммунное заболевание 6) непереносимость лактозы, 7) ортопедические ограничения; 8) потеря/увеличение массы тела на ≥10% за последний год; 9) регулярное использование любых лекарств, которые могут повлиять на сердечно-сосудистую функцию и/или обмен веществ; 10) количество лейкоцитов более 8×103/мкл. Волонтерам была подробно разъяснена цель исследования, было получено их письменное информированное согласие, и протокол был одобрен Комитетом по этике Университета Йонсей.

В рамках 8-недельного рандомизированного двойного слепого плацебо-контролируемого исследования 60 субъектов были случайным образом распределены для приема плацебо (n = 30) или 5 г хлореллы (n = 30) в виде таблеток. Таблетки с тестируемым продуктом содержали только высушенную хлореллу (чистота 97%), экстрагированную из 100% Chlorella vulgaris в качестве активного ингредиента, а таблетки плацебо идентичного вида содержали лактозу. Субъектам было предложено принимать 5 г в день хлореллы (12 таблеток в день) или плацебо (12 таблеток в день), по 4 таблетки после каждого основного приема пищи. Всем участникам было рекомендовано поддерживать привычный образ жизни и питания.

Вес тела и рост измеряли по утрам. Индекс массы тела (ИМТ) рассчитывали как массу тела в килограммах, деленную на рост в квадратных метрах (кг/м2). Давление крови (АД) измеряли на левой руке пациентов в положении сидя после 20-минутного отдыха. Образцы венозной крови собирали в обработанные ЭДТА и простые пробирки после ночного голодания (12 часов). Пробирки сразу же помещали на лед до прибытия в аналитическую лабораторию (в течение 1-3 часов). Образцы крови в пробирках с ЭДТА использовали для выделения мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС), а образцы в простых пробирках разделяли на сыворотку и хранили при -70 °С до анализа. Из крови выделяли мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) путем центрифугирования. Цитотоксическую активность естественных клеток-киллеров (NK) определяли с помощью наборов для анализа нерадиоактивной цитотоксичности. Сывороточные концентрации интерферона-γ (IFN-γ), интерлейкина-1β (IL-1β) и интерлейкина-12 (IL-12) измеряли с использованием соответствующих наборов для анализа. В сыворотке крови, взятой натощак, измеряли уровни общего холестерина и триглицеридов (ТГ), липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) и ЛПВП-холестерина (ЛПВП-Х). ЛПНП-холестерин (ЛПНП-Х) оценивали косвенно, используя формулу Фридевальда для субъектов с концентрацией ТГ в сыворотке <400 мг/дл (4,52 моль/л). У субъектов с концентрациями ТГ в сыворотке ≥400 мг/дл (4,52 моль/л) ЛПНП измеряли ферментативным методом. Количество лейкоцитов (WBC) определяли с помощью автоматических гематологических анализаторов.

Информация об обычном рационе испытуемых была получена с использованием как метода 24-часового метода припоминания, так и полуколичественного опросника по частоте приема пищи (SQFFQ), достоверность которого была предварительно проверена [25]. Мы использовали первое для проведения анализа, а второе - для проверки того, соответствуют ли данные, собранные с помощью метода 24-часового припоминания, обычному рациону питания. Пищевая энергетическая ценность и содержание питательных веществ из были рассчитаны с использованием программы компьютерного анализа питания. Общий расход энергии (TEE) (ккал/день) рассчитывался согласно стандартам активности, включая скорость основного обмена, физическую активность в течение 24 часов [26] и специфическое динамическое действие пищи. Базальная скорость метаболизма для каждого субъекта была рассчитана по уравнению Харриса-Бенедикта [27]. Был также выполнен статистический анализ данных.

Результаты

Из 60 зарегистрированных субъектов наблюдения выбыли 9: 7 из группы плацебо и 2 из группы хлореллы. Никаких серьезных побочных реакций, вызванных добавлением хлореллы, отмечено не было.

В таблице 1 представлены общие и биохимические параметры, измеренные в начале исследования и после 8-недельного приема хлореллы. Гендерное распределение и возраст существенно не различались в группах хлореллы и плацебо. Никаких достоверных различий между исходными уровнями или измененными уровнями индекса массы тела, WHR, артериального давления, количества лейкоцитов и липидных профилей между двумя группами не наблюдалось (Таблица 1). Кроме того, не было обнаружено значимых различий в ежедневном рационе и расходе энергии между двумя группами (Таблица 2).

Общая характеристика пациентов в в начале и после завершения исследования (среднее ± стандартная ошибка среднего)

эффект кратковременного применения хлореллы таб.1.jpg

Таблица 2
Ежедневное потребление пищи и общий расход энергии у корейцев до и после 8-недельного исследования (среднее ± стандартная ошибка среднего)

эффект кратковременного применения хлореллы таб.2.jpg

TEE: общий расход энергии, TCI: общее потребление калорий, CHO: углеводы.

Концентрации цитокинов в сыоротке крови до и после приема хлореллы
На рис.1 показаны сывороточные концентрации цитокинов INF-γ, IL-1 и IL-12 в группах хлореллы и плацебо до и после курса приема. Начальные уровни этих цитокинов значимо не различались в этих группах. После курса приема сывороточные концентрации INF-γ (р<0,05) и IL-1β (р<0,001) значимо увеличились в группе с хлореллой. Кроме того, значения разницы в концентрациях INF-γ (p<0,001), IL-1β (p<0,01) и IL-12 (p<0,01) до и после приема в группе хлореллы достоверно отличались от группы плацебо.

эффект кратковременного применения хлореллы рис.1.jpg

Подпись к рисунку 1. Концентрация IFN-γ, IL-1 и IL-12 в сыворотке крови до и после 8-недельного приема хлореллы. Не было достоверных различий в исходных значениях между группой хлореллы и группой плацебо. * р<0,05, ** р<0,01 по сравнению со значением на исходном уровне в каждой группе; ϕ р<0,01, ϕϕ р<0,001, сравнение значений изменения Δ между группой хлореллы и группой плацебо.

Здесь и далее: белые столбики – начало исследования, серые столбики- через 8 недель;

Активность естественных клеток-киллеров
Активность клеток естественных киллеров (NK) (%) измеряли на основе соотношений эффекторных клеток (E) (PBMC) от каждого участника к клетке-мишени (T) (клетки K562) как 5: 1 или 1,25: 1. Как показано на рисунке 2, 2, активность NK-клеток в обоих условиях (E: T = 5: 1 и 1,25: 1) значительно возросла в группе хлореллы через 8 недель (p <0,05, p <0,05 соответственно). Активность в группе плацебо, по-видимому, несколько снизилась, но различия не были статистически значимы. Кроме того, значимые различия в значениях разницы концентраций наблюдались между группой хлореллы и группой плацебо (E: T = 5: 1, p <0,05 и E: T = 1,25: 1, p <0,05 соответственно).

эффект кратковременного применения хлореллы рис.2.jpg

Подпись к рисунку 2. Активность NK-клеток эффекторных клеток до и после 8-недельного приема хлореллы. Не было достоверных различий в исходных значениях между группой хлореллы и группой плацебо. * р<0,05 по сравнению со значением на исходном уровне в каждой группе; ϕ р<0,05, сравнение значений изменения Δ между группой хлореллы и группой плацебо. E: эффекторные клетки (мононуклеарные клетки периферической крови испытуемых), T: клетки-мишени (клетки K562).

Корреляции между измененными уровнями IL-12, IFN-γ и IL-1β в сыворотке и активностью NK-клеток

Как показано на рис.3, разность активности NK-клеток (%) (E: T = 5: 1) положительно коррелировала с таковыми для сывороточного IL-1β (r= 0,280, p = 0,047) и IFN-γ. (r = 0,271, р <0,005). Существенные сильные положительные корреляции также наблюдались среди измененных уровней сывороточных цитокинов; между IFN-γ и IL-1β (r = 0,448, р <0,001), между IL-12 и IL-1β (r = 0,416, р = 0,003) и между IL-12 и IFN-γ (r = 0,570, р <001).

эффект кратковременного применения хлореллы рис.3.jpg

Подпись к рисунку 3. Взаимосвязь между измененными уровнями активности NK-клеток и сывороточного IFN-γ, IL-1β и IL-12. r: коэффициент корреляции Пирсона. E: эффекторные клетки (мононуклеарные клетки периферической крови от субъектов), T: клетки-мишени (клетки K562).

Обсуждение
Данное исследование показывает, что 8-недельное добавление таблеток хлореллы может оказать полезный иммуностимулирующий эффект на нормальных (неинфицированных) людей за счет усиления активности NK-клеток и продуцирования INF-γ и IL-12, а также цитокинов IL-1β и Th-1.

Т-хелперы (Th) делятся на два функциональных подкласса на основе цитокинов, которые они продуцируют, и их влияния на клеточный и гуморальный иммунитет: лимфоциты Th-1 и Th-2 [28]. Клетки Th-1 продуцируют IL-2, INF-γ, TNF-α и IL-12 и усиливают клеточный иммунитет, тем самым ингибируя клеточную иммунологическую активность. С другой стороны, клетки Th-2 продуцируют IL-4, IL-5, IL-6 и IL-10 и усиливают гуморальный иммунитет. Цитокины, полученные из Th-1 и Th-2, также перекрестно регулируют друг друга в различных клинических условиях. Hasegawa и соавторы сообщили, что на модели мышей, зараженных Listeria monocytogenes, экстракт хлореллы (из Chlorella vulgaris, CVE) увеличивал уровни IL-12 и IFN-γ [29], которые способствуют дифференциации наивных CD4 + T-клеток в Th-1 клетки, продуцирующих IFN-γ, но ингибируют образование клеток Th-2, продуцирующих IL-4. В их другом сообщении, пероральное введение CVE мышам ингибировало выработку иммуноглобулина E (IgE) против казеина вместе с нарушением реакции Th-2 [11]. Ewartet и соват. показали, что экстракт хлореллы (из Chlorella pyrenoidosa, CPE) индуцирует реакцию цитокинов, синтезируемых Th-1 (IFN-γ и TNF-α) и значительно увеличивает синтез противовоспалительных регуляторных цитокинов (IL-10) в PBMC человека, стимулируемых ex vivo [30]. В нашем исследовании у субъектов, которые принимали таблетки хлореллы в течение 8 недель, наблюдалось значительное повышение уровней INF-γ в сыворотке и тенденция к увеличению уровней IL-12 по сравнению с теми, кто принимал плацебо, что указывает на то, что добавки с хлореллой могут вызывать продукцию INF-γ и IL-12, способствующие Th-1-опосредованной иммунной реакции у людей.

Мы также обнаружили увеличение уровня сывороточного IL-1β, который является членом семейства цитокинов IL-1 и продуцируется активированными макрофагами [31]. Этот цитокин является важным медиатором воспалительного ответа и участвует в различных клеточных активностях, включая пролиферацию, дифференцировку и апоптоз клеток [31]. IL-1β стимулирует клетки к функционированию как эффекторные клетки иммунного или воспалительного ответа. Hunter и соавторы [32] сообщили в результатах исследования на иммунодефицитных мышах, что IL-1β необходим для IL-12, чтобы стимулировать выработку IFN-γ NK-клетками [32]. Согласно Tominaga и соавторам [33], IL-12 и IL-1β синергически индуцируют пролиферацию Т-клеток и продуцируют стимулированные IFN-γ и IL-12 Т-клетки, которые реагируют на IL-18 или IL-1β путем их пролиферации и продукцим IFN-γ, хотя уровни IL-1β-индуцированных ответов были ниже. Наш результат может частично соответствовать сообщению Ishikawa и соавт. о том, что богатая полисахаридами фракция Chlorella pyrenoidosa индуцирует IL-1β и TNF-α в клетках макрофагов [34]. Клетки хлореллы, по-видимому, стимулируют реакцию Th-1. Однако мы не изучали цитокины-производные Th-2, такие, как IL-4 или IL-6, поэтому это предположение нужно подтвердить в дальнейших исследованиях.

В нашем исследовании пациенты, которые потребляли хлореллу, демонстрировали значительное увеличение активности естественных киллеров (NK). Этот результат может частично соответствовать данным Dantas с соавт. о том, что пероральное введение экстракта хлореллы (CVE) значительно увеличивало активность NK-клеток у нормальных (неинфицированных) мышей, а также у мышей, инфицированных Listeria monqtogenes [35]. Кроме того, у CV-обработанных животных наблюдалось увеличение выживаемости в зависимости от полученной дозы хлореллы. NK-клетки были впервые идентифицированы по их цитотоксической активности против опухолевых клеток, что предполагает, что они принимают участие в иммунологическом надзоре против неоплазии. Появляются новые свидетельства того, что NK-клетки являются важными медиаторами врожденной резистентности против различных патогенных внутриклеточных микроорганизмов [36]. Их основной функцией является производство раннего IFN-γ, который имеет решающее значение для активации антимикробных функций макрофагов [37-42]. Кинетика продукции IFN-γ NK-клетками после инфекции чрезвычайно быстрая, что обеспечивает источник функционального цитокина в критический момент экспансии Т-клеток [39,43,44]. В нашем исследовании измененный уровень активности NK-клеток после приема хлореллы достоверно положительно коррелирует с сывороточными концентрациями IFN-γ. Значимо сильные положительные корреляции также наблюдались среди измененных уровней IFN-γ, IL-12 и IL-1β, т.е. цитокинов Th-1.

Возможно, в дальнейшем потребуется дальнейшее исследование с большим количеством испытуемых и в течение более длительного времени, чтобы подтвердить и уточнить картину результатов. Как показано на рисунках, сывороточные уровни INF-γ и IL-12 были значительно снижены в группе плацебо через 8 недель, даже если разница концентраций этих цитокинов была значительно больше в группе хлореллы, чем в группе плацебо. Мы попытались найти факторы, которые могут повлиять на уменьшение этих параметров в группе плацебо, но однозначно определить причину нелегко. Однако характер корреляции между активностью NK-клеток и уровнями цитокинов был всегда положителен, что может указывать на достоверность результатов измерений и результатов.

Заключение

Исследование было специально проведено на нормальных здоровых (неинфицированных) корейцах, поэтому результаты нужно трактовать с осторожностью применительно к представителям других этнических или географических групп, чьи биохимические характеристики могут отличаться от таковых у наших субъектов. Несмотря на эти ограничения, 8-недельное потребление хлореллы у здоровых корейцев увеличивало активность NK-клеток и продуцировало INF-γ и IL-12, а также IL-1β и Th-1. Кроме того, изменения в активности NK-клеток положительно коррелировали с уровнями цитокинов после завершения исследования. Эти результаты дополняют данные литературы о полезном иммуностимулирующем эффекте добавок хлореллы в клинических исследованиях.

Сокращения

ИМТ: индекс массы тела; BP: кровяное давление; E: эффекторная клетка, INF, интерферон; ИЛ: Интерлейкин; HDL-C: холестерин липопротеинов высокой плотности; ЛПНП-Х: холестерин липопротеинов низкой плотности; НК: Натуральный киллер; PBMC: мононуклеарные клетки периферической крови; Т: целевая клетка; TEE: общий расход энергии; WBC: лейкоциты.

Литература
1. Borowitzka MA. In: Micro-algal biotechnology. Borowitzka LJ, editor. New York: Cambridge University Press; 1988. Vitamins and fine chemicals from micro-algae; p. 153.
2. Schubert LE. In: Progressing physiological research. Round FE, Chapman DJ, editor. Bristol, U.K: Biopress Ltd; 1988. The use of spirulina and chlorella as food resource for animals and humans; p. 23.
3. Morita K, Matsueda T, Lida T, Hasegawa T. Chlorella accelerates dioxin excretion in rats. J Nutr. 1999;129:1731–1736. [PubMed]
4. Morita K, Ogata K, Hasegawa T. Chlorophyll derived from Chlorella inhibits dioxin absorption from the gastrointestinal tract and accelerates dioxin excretion in rats. Environ Health Perspect. 2001;109:289–294. [PMC free article] [PubMed]
5. Okudo M, Hasegawa T, Sonoda M, Okabe T, Tanaka M. The effects of Chlorella on the level of cholesterol in serum and liver. Jpn J Nutr. 1975;33:3–8.
6. Fujiwara Y, Hirakawa K, Sinpo K. Effect of long-term administration of Chlorella tablets on hyperlipemia. J Jpn Soc Nutr Food Sci. 1990;43:167–173.
7. Nakamura T, Hasegawa T, Ueno S. et al. Effect of g-aminobutyric acid-rich Chlorella on blood pressure in mildly hypertensive subjects. Jpn Pharmacol Ther. 2000;28:529–533.
8. Lee SH, Kang HJ, Lee HJ, Kang MH, Park YK. Six-week supplementation with Chlorella has favorable impact on antioxidant status in Korean male smokers. Nutrition. 2010;26:175–183.[PubMed]
9. Queiroz ML, Bincoletto C, Valadares MC, Dantas DC, Santos LM. Effects of Chlorella vulgaris extract on cytokines production in Listeria monocytogenes infected mice. Immunopharmacol Immunotoxicol. 2002;24:483–496. [PubMed]
10. Hasegawa T, Matsuguchi T, Noda K, Tanaka K, Kumamoto S, Shoyama Y, Yoshikai Y. Toll-like receptor 2 is at least partly involved in the antitumor activity of glycoprotein from Chlorella vulgaris. Int Immunopharmacol. 2002;2:579–589. [PubMed]
11. Tanaka K, Yamada A, Noda K, Hasegawa T, Okuda K, Shoyama Y, Nomoto K. A novel glycoprotein obtained from Chlorella vulgaris strain CK22 shows antimetastatic immunopotentiation. Cancer Immunol Immunother. 1998;45:313–320. [PubMed]
12. Shibata S, Natori Y, Nishihara T, Tomisaka K, Matsubara K, Sanawa H, Nguyen VC. Antioxidant and anticataract effect of Chlorella on rats with streptozotocin-induced diabetes. J Nutr Sci Vitaminol. 2003;49:334–339. [PubMed]
13. Rodriguez-Lopez M, Lopez-Quijada C. Plasma glucose and plasma insulin in normal and alloxanized rats treated with Chlorella. Life Sci. 1971;10:57–68. [PubMed]
14. Lee HS, Choi CY, Cho C, Song Y. Attenuating effect of chlorella supplementation on oxidative stress and NF kappa B activation in peritoneal macrophages and liver of C57BL/6 mice fed on an atherogenic diet. BiosciBiotechnol Biochem. 2003;67:2083–2090. [PubMed]
15. Tanaka K, Yamada A, Nada K, Shoyama Y, Kubo C, Nomoto K. Oral administration of a unicellular green algae, Chlorella vulgaris, prevents stress-induced ulcer. Plant Med. 1997;63:465–466.[PubMed]
16. Tanaka K, Konishi F, Himeno K, Taniguchi K, Nomoto K. Augmentation of antitumor resistance by a strain of unicellular green algae, Chlorella vulgaris. Cancer Immunol Immunother. 1984;17:90–94.[PubMed]
17. Konishi F, Tanaka K, Himeno K, Taniguchi K, Nomoto K. Antitumor effect induced by a hot water extract of Chlorella vulgaris (CE): resistance to Meth-A tumor growth mediated by CE-induced polymorphonuclear leukocytes. Cancer Immunol Immunother. 1985;19:73–78. [PubMed]
18. Tanaka K, Tomita Y, Tsuruta M. et al. Oral administration of Chlorella vulgaris augments concomitant antitumor immunity. Immunopharmacol Immunotoxicol. 1990;12:277-21. [PubMed]
19. Tanaka K, Koga T, Konishi F. Augmentation of host defense by a unicellular green alga, Chlorella vulgaris, to Escherichia coli infection. Infect Immun. 1986;53:267–271. [PMC free article][PubMed]
20. Hasegawa T, Tanaka K, Ueno K. Augmentation of the resistance against Escherichia coli by oral administration of a hot water extract of Chlorella vulgaris in rats. Int J Immunopharmacol. 1989;11:971–976. [PubMed]
21. Hasegawa T, Okuda M, Nomoto K, Yoshikai Y. Augmentation of the resistance against Listeria monocytogenes by oral administration of a hot water extract of Chlorella vulgaris in mice. Immunopharmacol Immunotoxicol. 1994;16:191–202. [PubMed]
22. Hasegawa T, Okuda M, Makino M, Hiromatsu K, Nomoto K, Yoshikai Y. Hot water extracts of Chlorella vulgaris reduce opportunistic infection with Listeria monocytogenes in C57BL/6 mice infected with LP-BM5 murine leukemia viruses. Int J Immunopharmacol. 1995;17:505–512.[PubMed]
23. Ibusuki K, Minamishima Y. Effect of Chlorella vulgaris extracts on murine cytomegalovirus infections. Nat Immun Cell Growth Regul. 1990;9:121–128. [PubMed]
24. Hasegawa T, Ito K, Ueno S. et al. Oral administration of hot water extracts of Chlorella vulgaris reduces IgE production against milk casein in mice. Int J Immunopharmacol. 1999;21:311–323.[PubMed]
25. Shim JS, Oh KW, Suh I, Kim MY, Shon CY, Lee EJ, Nam CM. A study on validity of a 299 semiquantitative food frequency questionnaire of Korean adults. Kor J Community Nutr. 2002;7:484–494.
26. Christian JL, Greger JL. Nutrition for Living. Redwood City, CA: Benjamin/ Cummings; 1994. p. 111.
27. The American Dietetic Association. Handbook of clinical dietetics. 2. New Haven, CT: Yale University Press; 1992. pp. 5–39.
28. Nair MP, Kandaswami C, Mahajan S. et al. The flavonoid, quercetin, differentially regulates Th-1 (IFNgamma) and Th-2 (IL4) cytokine gene expression by normal peripheral blood mononuclear cells. BiochimBiophys Acta. 2002;1593:29–36. [PubMed]
29. Hasegawa T, Kimura Y, Hiromatsu K. et al. Effect of hot water extract of Chlorella vulgaris on cytokine expression patterns in mice with murine acquired immunodeficiency syndrome after infection with Listeria monocytogenes. Immunopharmacology. 1997;35:273–282. [PubMed]
30. Ewart HS, Bloch O, Girouard GS. et al. Stimulation of cytokine production in human peripheral blood mononuclear cells by an aqueous Chlorella extract. Planta Med. 2007;73:762–768. [PubMed]
31. Cheng FC, Lin A, Feng JJ, Mizoguchi T, Takekoshi H, Kubota H, Kato Y, Naoki Y. Effects of Chlorella on Activities of Protein Tyrosine Phosphatases, Matrix Metalloproteinases, Caspases, Cytokine Release, B and T Cell Proliferations, and Phorbol Ester Receptor Binding. J Med Food. 2004;7:146–152. [PubMed]
32. Hunter CA, Chizzonite R, Remington JS. IL-1 beta is required for IL-12 to induce production of IFN-gamma by NK cells. A role for IL-1 beta in the T cell-independent mechanism of resistance against intracellular pathogens. J Immunol. 1995;155:4347–4354. [PubMed]
33. Tominaga K, Yoshimoto T, Torigoe K, Kurimoto M, Matsui K, Hada T, Okamura H, Nakanishi K. IL-12 synergizes with IL-18 or IL-1beta for IFN-gamma production from human T cells. Int Immunol. 2000;12:151–160. [PubMed]
34. Ishikawa Y, Sugiyama H, Stylianou E, Kitamura M. Bioflavonoid quercetin inhibits interleukin-1-induced transcriptional expression of monocyte chemoattractant protein-1 in glomerular cells via suppression of nuclear factor-kappaB. J Am Soc Nephrol. 1999;10:2290–2296. [PubMed]
35. Dantas DC, Kaneno R, Queiroz ML. The effects of Chlorella vulgaris in the protection of mice infected with Listeria monocytogenes: Role of natural killer cells. Immunopharmacol Immunotoxicol. 1999;21:609–619. [PubMed]
36. Brombacher F, Kopf M. Innate versus acquired immunity in listeriosis. Res Immunol. 1996;147:505–551. [PubMed]
37. Teixeira HC, Kaufmann SHE. Role of NKl.1' cells in experimental listeriosis. NK1+ cells are early IFN-gamma producers but impair resistance to Listeria monocytogenes infection. J Immunol. 1994;152:1873–1882. [PubMed]
38. Dunn PL, North RJ. Early gamma interferon production by natural killer cells is important in defense against murine listeriosis. Infect Immunity. 1991;59:2892–2900. [PMC free article] [PubMed]
39. Bancroft GJ. The role of natural killer cells in innate resistance to infection. Curr OF Immunol. 1993;5:503–510. [PubMed]
40. Kaufmann SHE. Immunity to intracellular bacteria. Annu Rev Immunol. 1993;11:129–163.[PubMed]
41. Denis M. Interferon-gamma-treated murine macrophages inhibit growth of tubercle bacilli via the generation of reactive nitrogen intermediates. Cell Immunol. 1991;132:150–157. [PubMed]
42. Nathan CF, Murray HW, Wiebe MB, Rubin BY. Identification of interferon-gamma as the lymphokine that activates human macrophage oxidative metabolism and antimicrobial activity. J Exp Med. 1983;158:670–689. [PMC free article] [PubMed]
43. Bancroft GJ, Schreiber RD, Bosma GC, Bosma MJ, Unanue ER. A T cell independent mechanism of macrophage activation by interferon gamma. J Immunol. 1987;139:1104–1107. [PubMed]
44. Bancroft GJ, Schreiber RD, Unanue ER. Natural immunity: A T-cell independent pathway of macrophage activation defined in the scid mouse. Immunol Rev. 1991;124:5–24. [PubMed]

Источник: Jung Hyun Kwak, Seung Han Baek, Yongje Woo, Jae Kab Han, Byung Gon Kim, Oh Yoen Kim, Jong Ho Lee. Beneficial immunostimulatory effect of short-term Chlorella supplementation: enhancement of Natural Killer cell activity and early inflammatory response (Randomized, double-blinded, placebo-controlled trial). Nutr J. 2012; 11: 53.

Перевод и редактирование: Г.Б.Большакова